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单克隆抗体在日常应用中一定要注意这些事项

时间:2019-07-24 浏览次数:41

   单克隆抗体是一种免疫学技术,将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞进行细胞融合,获得既能产生抗体,又能无限增殖的细胞,并以此生产抗体。是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
 
  单克隆抗体的基本原理:
  哺乳类细胞DNA合成可分为两条途径,①从头(denovo)合成途径,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻断;②补救(salvag-e)合成途径,在次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)存在下利用次黄嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。
  单克隆抗体技术的流程为:脾细胞和骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)作用下发生细胞融合;加人HAT选择培养基后,未融合的骨髓瘤细胞因其从头合成途径被氨基蝶呤阻断,而又缺乏HGPRT不能利用补救途径合成DNA,从而死亡;未融合的脾细胞难以在体外培养而死亡;融合细胞因从脾细胞获得HGPRT,故可在HAT选择培养基中存活和增殖。
 
  单克隆抗体的优点:
  1、杂交瘤可以在体外地存活并传代,只要不发生细胞株的基因突变,就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
  2、可以用相对不纯的抗原,获得大量高度特异的、均一的抗体。
  3、由于可能得到“无限量”的均一性抗体,所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法,如IRMA和ELISA等。
  4、由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能,可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
 
  单克隆抗体的使用注意事项:
  1、虽然本试剂盒过期后很久还有使用价值但还是请您在有效期内使用。
  2、在检测腹水类单抗时要稀释到1/5万,虽然可以分辨但并不建议您这样做。此类样品成分十分复杂,有干扰结果的可能。在此种情况下您可以选择的C030215抗体鉴定试剂。它会给您带来满意的结果。
  3、手洗板子时一定要把孔加满,停留10秒然后弃尽,最后要拍干净。特别是在酶标二抗温育后洗板时一定要把酶吸出而不是甩出,要吸净。这个在手工洗板时对结果很重要。
  4、一次没用完的板子要带干燥剂放自封袋封好,随盒存放。
  5、拿放板子时不要剧烈抖动,以免孔间交叉污染出现错误结果。
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